Příprava roztoků pro klonování
IPTG (240 mg/ml zásobní roztok)
- Navážíme 0,24 g IPTG a rozpustíme v 10 ml MiliQ vody.
- Ve Flow Boxu přefiltrujeme přes 0,22 µm Millipore filtr do sterilní 15 ml falkony.
- Rozpipetujeme na alikvoty a skladujeme při – 20°C.
X-Gal (12,5 mg/ml zásobní roztok)
- Do 1,5 ml eppendorfek navážíme po 12,5 mg X-Gal a rozpustíme v 1ml dimethylformamidu.
- Skladujeme při – 20°C.
Ampicilin (0,1 g/ml zásobní roztok)
- Do 15 ml falkony navážíme 1 g ampicilinu a rozpustíme v 10 ml MiliQ vody.
- Ve Flow Boxu přefiltrujeme přes 0,22 µm Millipore filtr do sterilní 15 ml falkonky.
- Rozpipetujeme po 1 ml do 1,5 ml eppendorfek a skladujeme při – 20°C.
LB agar, 1 litr
- Navážíme: 10 g Tryptonu
5 g Yeast Extraktu
5 g NaCl
15 g agaru - Rozpustíme v 900 ml MilliQ vody.
- Upravíme pH na 7 pomocí NaOH.
- Doplníme na 1 litr.
- Rozdělíme do čtyřech lahví po 0,25 l, vhodíme míchadlo a sterilizujeme klávováním.
Před naléváním misek, rozehřejeme tuhý LB agar na míchačce. Ve Flow Boxu pak přidáme 250 µl ampicilinu ze zásobního roztoku, promícháme a naléváme do Petriho misek.
SOC médium, 100 ml
- 2M Mg2+roztok, 10 ml
- Navážíme: 2,033 g MgCl2•6H2O
2,465 g MgSO4•7H2O - Doplníme na 10 ml.
- Ve Flow Boxu přefiltrujeme přes 0,22 µm Millipore filtr do sterilní 15 ml falkonky.
- 2M Glc, 10 ml
- Navážíme 3,6032 g glukózy
- Doplníme na 10 ml.
- Ve Flow Boxu přefiltrujeme přes 0,22 µm Millipore filtr do sterilní 15 ml falkonky.
- 1M KCl
- Navážíme 0,7455 g KCl
- Doplníme na 10 ml.
- 1M NaCl
- Navážíme 0,5844 g KCl
- Doplníme na 10 ml.
Vlastní SOC médium
- Navážíme: 2 g Tryptonu
0,5 g Yeast Extraktu - Rozpustíme v MilliQ vodě.
- Přidáme: 1 ml 1M NaCl
0,25 ml M KCl - Doplníme na 97 ml MilliQ vody.
- Sterilizujeme klávováním.
- Po zchladnutí, ve Flow Boxu přidáme:
1 ml 2M Mg2+roztoku
1 ml 2M roztoku Glc - Doplníme sterilní destilovanou vodou na 100 ml.
- pH by mělo být 7
Na začátek >>
